Как набирать в пипетку жидкость
4.3. Пипетки
Пипетки (рис. 78) служат для измерения объемов жидкости в виде целой порции (объем пипетки от 0,1 до 200 мл, рис. 78, а-в) или ее части (рис. 78, г).
Пипетку заполняют при помощи резиновой груши, присоединив ее к верхнему концу пипетки. Применяют и специальные груши, снабженные тремя клапанами (рис. 78, д). Клапан 7 выпускает воздух при сжатии груши, клапан 2 позволяет выдавливать жидкость из пипетки при сжатии груши, а при надавливании клапана 3 груша забирает жидкость через пипетку. Заполнять пипетку жидкостью можно и при помощи слабого вакуума.
Засасывать жидкость в пипетку ртом не рекомендуется. Это опасно для здоровья (жидкость и ее пары могут попасть в рот и легкие) и, кроме того, приводит к загрязнению жиром и слюной внутренних стенок пипетки.
В пипетку набирают столько жидкости, чтобы она поднялась на 2-3 см выше отметки, затем быстро снимают грушу и закрывают верхнее отверстие пипетки указательным пальцем правой руки, придерживая пипетку большим и средним пальцами. Избыток жидкости выпускают, слегка ослабляя нажим пальца и наблюдая за перемещением мениска жидкости до отметки, которая должна быть на уровне глаза наблюдателя так, чтобы ее кольцо сливалось в одну черту. Если при совмещении мениска 2 (рис. 79, а) с чертой деления 7 на пипетке на ее конце остается висеть капля, ее следует осторожно удалить кусочком фильтровальной бумаги.
Считают, что продолжительность свободного вытекания воды из пипеток вместимостью 5, 10, 25, 50 и 100 мл должна быть равной соответственно 15, 20, 25, 30 и 40 с.
Наиболее точные результаты получают тогда, когда конец пипетки при ее опорожнении прикладывают к стенке сосуда-приемника. После того, как жидкость вытечет, пипетку держат еще 5-7 с прислоненной к стенке сосуда, слегка поворачивая вокруг оси. Затем пипетку вынимают, не обращая внимания на остаток жидкости в кончике нижней трубки. Этот остаток учитывают при калибровке пипетки, поэтому выдувать жидкость из нее нельзя.
Рис. 79. Наблюдение за положением мениска (с), пипетка для ядовитых жидкостей (б) и самозаполняющаяся пипетка (в)
В препаративной химии, когда требуется введение в реакционную смесь последовательных порций жидкости одного и того же объема, применяют опрокидывающиеся пипетки тип; «скворец» (рис. 78, е). Эту пипетку сначала наклоняют вправо чтобы жидкость из конической колбы заполнила через отверстие 7 внутренний сосуд 3, а затем влево, чтобы вылить отмеренный объем жидкости.
Для отмеривания точных порций токсичной жидкости одного объема применяют пипетку, показанную на рис. 79, б.
Пипетка имеет две отметки 7 и 2, определяющие выливаемый объем жидкости. Чтобы заполнить такую пипетку, резиновой грушей создают избыточное давление в склянке 4 с жидкостью и через боковой отвод 5, открыв трехходовой кран 6, заполняют пипетку. Избыток жидкости сливают при помощи крана 7. Отмеренный объем жидкости выливают в сосуд-приемник, закрыв кран 7 в тот момент, когда уровень жидкости достигнет нижне отметки 2.
Рис 80. Поршневая микропипетка (а) и штатив для хранения обычных пипеток (б)
Существуют различные типы самозаполняющихся пипеток, один из них изображен на рис. 79, в. Принцип работы такой пипетки следующий: сначала открывают кран 3 при закрытом кране 4 и заполняют пипетку 2 жидкостью из резервуара 1 точно до верхней метки 5. Затем кран 3 закрывают и спускают отмеренный объем жидкости при помощи крана 4 до нижней метки 5. Верхняя часть пипетки имеет небольшие отверстия, чтобы легче было регулировать скорость наполнения и опорожнения пипетки при приближении уровня жидкости к меткам 5.
Хранить вымытые пипетки следует носиками вверх в высоких цилиндрах, дно которых покрыто фильтровальной бумагой.
Остатки чистой воды, вытекающей из пипеток, всасываются бумагой, поэтому пипетки быстрее высыхают. Верхнюю часть носиков закрывают колпаком из полипропилена, полиэтилена или из фильтровальной бумаги. Иногда одевают на носик пипетки маленькую пробирку. Применяют для хранения пипеток и специальные подставки (рис. 80, б), которые вместе с пипетками следует убирать в шкаф из органического стекла для предохранения от загрязнения аэрозолями воздуха.
Каждую пипетку сразу после работы необходимо промыть чистой водой, этанолом и диэтиловым эфиром. Спускать промывную жидкость надо всегда через носик. Промывка позволяет избежать некоторых «необъяснимых» отклонений в опытах.
Пипетки обычно калибруют по чистой воде, поэтому ими нельзя отмеривать жидкости, вязкость которых заметно отличается от вязкости воды. Объем отобранной жидкости в этом случае не будет соответствовать указанному на пипетке. Для вязких жидкостей пипетку надо перекалибровать.
Если некоторые растворы оставляют на стенках пипетки прилипшие капли даже при хорошем обезжиривании стекла, то рекомендуют пипетки подвергать силиконированию, покрытию внутренних стенок тончайшей силиконовой пленкой, не смачивающейся водой. Силиконированную пипетку калибруют по чистой воде при 20 °С. У силиконированных пипеток мениск жидкости выпуклый.
Для силиконирования чистую и высушенную пипетку заполняют 2%-м раствором диметилдихлорсилана (CH3)2SiCl2 в диэтиловом эфире или бензине и выдерживают 1-2 мин, после чего раствор реагента выливают в склянку для последующего использования. Обработанную пипетку оставляют в вытяжном шкафу до исчезновения запаха и затем высушивают 10-20 мин при 120-140 o C.
Силиконирование проводят также и 3%-м раствором метилтрихлорсилана (CH3)SiCl3 в ССl в течение 2-3 мин. После удаления из пипетки раствора метилтрихлорсилана ее нагревают около 1 ч при 120-130 °С. Вместо высокотоксичных метилхлорсиланов можно использовать 3%-й раствор полиметилсилоксановых жидкостей (ПМС-200 и ПМС-300) в хлороформе СНС13. Пипетку заливают таким раствором на 2-5 мин, затем его сливают, а пипетку сушат 2 ч при 180-210 °С.
Образующаяся при силиконировании гидрофобная пленка не смывается водой и не разрушается кислотами. Ее можно удалить при кипячении пипетки в 10%-м водном растворе КОН или NaOH.
Работа с пипетками и бюретками. Мерные колбы
Работа с пипетками. Пипетки бывают различных видов: стеклянные пипетки Мора, стеклянные и автоматические градуированные пипетки. Пипетки применяют для отмеривания различных объемов жидкости. В данной работе пипетки используют для отмеривания объема титруемого раствора.
Для наполнения стеклянной пипетки жидкостью к ней присоединяют резиновую грушу. Грушу сдавливают, нижний конец пипетки опускают в жидкость и разжимают грушу. Жидкость заполняет пипетку. Вынимают нижний конец пипетки из жидкости. Снимают грушу и быстро закрывают верхнее отверстие пипетки указательным пальцем, не давая жидкости вытекать. Держа пипетку строго вертикально, поднимают ее так, чтобы метки оказалась на уровне глаз, затем понемногу ослабляют нажим пальца на верхнее отверстие пипетки, чтобы жидкость медленно вытекала. В тот момент, когда нижняя часть мениска опустится до нужной метки, опять плотно закрывают пальцем верхнее отверстие пипетки. Затем нижний конец пипетки помещают в сосуд, в который требуется вылить жидкость, и, подняв палец, дают жидкости свободно вытечь из пипетки. Отобрав очередную порцию раствора, пипетку ставят в штатив. По окончании работы пипетку тщательно промывают проточной водой, ополаскивают дистиллированной водой и помещают в специальный штатив.
При работе с автоматическими пипетками используют пластиковые наконечники. На нижний конец пипетки надевают наконечник, большим пальцем вдавливают поршень до первого упора, помещают наконечник в жидкость и отпускают поршень. Жидкость заполняет наконечник. Затем наконечник помещают в сосуд, в который требуется вылить жидкость, и, надавливают на поршень большим пальцем до второго упора. Жидкость струей выбрасывается из наконечника.
Каждый раствор берется своей пипеткой. Если во время выполнения определенного анализа приходится отбирать пипеткой один и тот же раствор несколько раз, то промывать пипетку или менять наконечник не нужно.
Работа с бюретками. Рабочий раствор (титрант) наливают в бюретку. Бюретку закрепляют в штатив в строго вертикальном положении. Затем бюретку наполняют раствором несколько выше верхней черты и открывают кран или зажим так, чтобы кончик бюретки наполнился раствором и вышли все пузырьки воздуха. Если из кончика бюретки пузырек не выходит, то, согнув каучуковую трубку, поднимают кверху кончик бюретки и открывают зажим. Пузырек быстро поднимается вверх и выходит. Если бюретка имеет кран, то удаляют пузырек, резко открыв кран и пустив большую струю раствора.
Подготовив бюретку и установив уровень жидкости немного выше нулевой черты, вынимают маленькую воронку, при помощи которой наполнялась бюретка, и доводят уровень жидкости в бюретке до нулевой черты. Воронку ставят на фильтровальную бумагу, чтобы не загрязнить ее посторонними веществами.
Для удобства отсчета за бюретку помещают лист белой бумаги, чтобы деления были лучше видны. Поверхность жидкости в бюретке представляется широкой вогнутой линией – мениском (рис.3.1). Отсчет проводится по нижнему краю мениска, при этом глаз наблюдателя должен находиться на уровне мениска.
Рис. 3.1. Отсчет объема жидкости в бюретке.
Наиболее часто употребляют бюретки вместимостью 25 или 50 мл. Бюретки калибруются в мл и десятых их долях. Нулевое деление помещается вверху бюретки. Хотя каждое, деление бюретки соответствует 0,1 мл, объем жидкости необходимо измерять с точностью до 0,03 мл (рис. 3.1). Если титрование ведется из бюретки вместимостью 50 мл, то точность отсчета будет равна 0,05 мл.
Объем расходуемого на титрование раствора не должен превышать вместимость одной бюретки (рекомендуется расходовать примерно 20-30 мл раствора).
Окончив титрование записывают объем раствора, затраченного на титрование. При окончании титрования оставшийся раствор выливают из бюретки. После этого бюретку тщательно моют водой и ополаскивают дистиллированной водой. Наполняют бюретку до самого верха дистиллированной водой и закрывают сверху перевернутым маленьким стаканом или пробиркой для предотвращения попадания пыли.
Мерные колбы. Мерные колбы используют для разбавления анализируемого раствора до определенного объема, а также для приготовления титрованных растворов (рис. 3.2). Мерные колбы представляют собой плоскодонные колбы с длинным узким горлышком, на которое нанесена круговая метка. Наполняют мерную колбу сначала через воронку, а под конец при помощи пипетки, жидкость из которой приливают по каплям до тех пор, пока нижний край мениска не коснется метки. После доведения объема раствора до метки колбу закрывают пробкой и раствор тщательно перемешивают.
Техника пипетирования
| При кажущейся простоте при работе с автоматической пипеткой необходимо учитывать некоторые нюансы. Предлагаем ознакомиться с рекомендациями по дозированию и техниками пипетирования, полезными при работе с разными видами жидкостей. |
. Потом выливают в нее воду из пипетки и вновь взвешивают. Взвешивание воды проводится три раза. Далее поступают так, как указано при проверке емкости мерной колбы.
, если масса воды, вылитой из пипетки при 17° С, равна 24,35 г. Кажущаяся плотность воды при 17,0° С равна 
. Следовательно, действительная емкость пипетки:
